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DNA 单链环化:
是将带有接头序列的双链DNA(Double- stranded DNA, dsDNA),通过高温变性形成单链DNA(Single-stranded DNA, ssDNA),环化引物与SSDNA的两端互补配对,在连接酶的催化下,SSDNA的首尾相连接,形成单链环状DNA(Single-strand circular DNA, sscirDNA)。
DNB 制备:
以单链环状DNA为模板,在DNA聚合酶作用下进行滚环扩增(Rolling Circle Amplification, RCA),将单链环状DNA扩增到100-1000拷贝,扩增产物称为DNB。DNB通过简单的质量浓度质控后,就可以用于下一步的上机测序,操作简单,且不需要昂贵的定量设备和耗材。
基于RCA的线性扩增技术,每次扩增都是以原始的DNA单链环为模板,使用保真性极高的聚合酶,使得在DNB的所有拷贝的同一个位置上出同样的错的几率几乎是零。RCA扩增技术有效的避免了PCR扩增错误指数积累的问题,从而大大提高测序的准确性。
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